PH0325 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit

Catalog No：PH0325
Size：500T | 1000T | 2500T
有效期：12个月
存储：冰袋运输，2-8 ℃保存,其中蛋白标准(5mg/ml BSA)-20℃保存

产品简介

考马斯亮兰 G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由 465nm 变为 595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙*醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保 SDS 的浓度低于 0.1%，Triton X-100 低于 0.1%，Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。


Components 500T 1000T 2500T Storage
5×G250 染色液 25mL 50mL 100mL 2-8℃
PBS 稀释液 30mL 30mL 30mL 2-8℃
蛋白标准(5mg/ml BSA) 1mL 1mL 1mL -20℃


操作说明


一．微孔酶标仪法


1. 完全溶解蛋白标准品，取 10μL，稀释至 250μL ，使终浓度为 0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀释标准品。


2. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 1ml 5×G250 染色液，加入 4ml 双蒸水，混匀成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。


3. 将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中，加 PBS 稀释液补足到 20 微升。相当于标准品浓度分别为0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.12、0.16、0.2mg/ml


4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2后。


5. 各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液，室温放置 3-5 分钟。


6. 用酶标仪测定 A595，或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。


7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。


二．分光光度计法


如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下：


1. 取八支（或者更多）干净的 10ml 离心管，标记上号。
2. 取 100μL BSA 加入 PBS 2.4ml 稀释至终浓度为 0.2mg/ml。
3. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 双蒸水，混匀成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。
4. 按下表加入试剂(以每孔 5ml 计，多余的用来清洗比色皿)


离心管号 1 2 3 4 5 6 7（样品管1） 8（样品管2） 9（样品管 3）
标准品 0μL 100μL 200μL 300μL 400μL 500μL 500μL适当稀释的样品1 500μL适当稀释的样品2 ……
稀释液（PBS） 500μL 400μL 300μL 200μL 100μL 0 0 0 0
1×G250 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml

5. 反应3分钟后测A595，或560-610nm之间的其它波长的OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：

离心管号 1 2 3 4 5 6 7 8 ……
加染色剂（分钟） 0 2 4 6 8 10 12 14 ……
测OD值（分钟） 3 5 7 9 11 13 15 17 ……


The Bradford Reagent can be used to determine the concentration of proteins in solution. The procedure is based on the formation of a complex between the dye, Brilliant Blue G, and proteins in solution. The proteindye complex causes a shift in the absorption maximum of the dye from 465 to 595 nm.