原产于中国PH1759 | 细胞活力检测试剂盒(CCK-8试剂盒)-经济型 / Cell Counting Kit-8 (CCK-8 CCK8)

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产品名称 : PH1759 | 细胞活力检测试剂盒(CCK-8试剂盒)-经济型 / Cell Counting Kit-8 (CCK-8 CCK8)
产品品牌 : 飞净 PHYGENE

 

产品简介:

CCK-8 试剂盒,是一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS 存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 

使用方法:

1、在 96 孔板中接种细胞悬液(100 ul /),通常细胞增殖实验每孔约 2000 个细胞,细胞毒性实验每孔约 5000 个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)

2、按照实验需要,进行培养并给予 0-10ul 特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24 48 小时)

3、每孔加入 10ul CCK-8 溶液。如果起始的培养体积为 200ul,则需加入 20ul CCK-8 溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和 CCK-8 但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但不加细胞

的孔作为空白对照。

4、在细胞培养箱内继续孵育 1-4 小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在 0.512 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光值,若无 450nm 滤光片,可以使用 420-480nm 的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于 600nm 的波长,例如 650nm,作为参考波长进行双波长测定。

6、如果需要暂时不测定 O.D 值,可以向每孔中加入 10ul 0.1M HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,避光保存在室温,24 小时内吸光度不会发生变化。

 

实验结果分析:

 

细胞活力 = [OD(加药) - OD(空白)] / [OD(0 加药) - OD(空白)] ×100%

抑制率 = [OD(0 加药) - OD(加药)] / [OD(0 加药) - OD(空白)] ×100%

 

OD(加药):具有细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光值

OD(空白):具有培养基、CCK-8 溶液,没有细胞的孔的吸光值

OD(0 加药):具有细胞、培养基、CCK-8 溶液,没有药物溶液的孔的吸光值

 

注意事项:

1、使用 96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将 96 孔板外围一圈加培养基、水或 PBS 保湿。同时,可以把 96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入 CCK-8 试剂后的培养时间。

3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入 CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和 CCK-8 溶液充分混匀。

4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5、加入 CCK-8 时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或 pH 值已变化,建议换用新鲜的培养基。

6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。

8、为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

 

保存方法:常温运输2-8保存,有效期一年,长期保存建议-20℃保存,不建议反复冻融。


温馨提示:1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

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