PH0234 | 血液RNA提取试剂盒 Blood RNA Kit

看了又看

产品名称 : PH0234 | 血液RNA提取试剂盒 Blood RNA Kit
产品品牌 : 飞净 PHYGENE

 


Catalog NoPH0234

Size50T | 100T

有效期:12个月

存储:冰袋运输,按标签说明保存相关试剂

 


Blood RNA Kit采用胍盐与硅胶柱结合法,能够快速有效地从血液中提取高质量的RNA。血液加入红细胞裂解液裂解红细胞,收集白细胞,在RNA抑制酶环境下裂解白细胞,使RNA释放出来后可以稳定的吸附在离心柱上,经过四步快速洗涤去除各种盐分和杂质,最后将RNA溶解于DEPC水中从离心柱上洗脱下来。


试剂盒组成


产品编号

50T

100T

纯化柱子

50

100

Buffer RL10X

30ml

60ml

TRNsol

55ml

110ml

Buffer WB

14ml

28ml

RNA Wash Buffer

13ml

26ml

DEPC-Water

13ml

20ml

说明书

1

1



储存和稳定性


TRNsol 4℃放置,其他试剂室温保存。试剂盒从购买之日起1年内有效。


预防RNase 污染,应注意以下几方面:

Ø 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。

Ø 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

Ø RNA Buffer PR中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在1500C烘烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase

Ø 配制溶液应使用RNase-free ddH2O。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),混匀后放置过夜,高压灭菌)。


溶液的稀释准备

Ÿ使用前Buffer WB和RNA Wash Buffer要加入无水乙醇,加入的体积参照产品标签的提示。

ŸBuffer R110X)需按1:9稀释。


操作步骤


1.红细胞裂解液稀释:根据处理的血液样品的体积吸取适量的Buffer RL(10X) ,用灭菌水1:9稀释。(例如处理单个200μl的血液样品,吸取140μl Buffer RL,加入1260μl 灭菌水)。


2.15mL离心管中加入小于1.5mL全血加入5体积的buffer RL工作液(buffer RL经过稀释


3.冰上放置 10-15 分钟,其间颠倒混匀两次。

注意:在放置过程中,血液会从雾状变成透亮的溶液。透亮的溶液就表明了红细胞已裂解。如必要的话,可延长至 20 分钟。


4.4℃2100rpm(~400×g离心10分钟,小心完全吸弃上清液。

5. 立即涡旋20秒,打散白细胞沉淀。向沉淀中加入1ml TRNsol,剧烈涡旋重悬细胞,转移裂解液至1.5ml离心管中,室温放置2-5min

6. 加入0.2ml氯仿。盖上离心管盖子,剧烈地振荡15sec,在冰上孵育5min。室温下,12,000xg下离心10min
此时混合物分成三层:底层为苯酚氯仿相层,中间层,和上层水相层。RNA完全存在于水相中。

7. 转移不多于80%上层水相至新的离心管中,缓慢加入0.7倍体积的无水乙醇,混匀。

8. 将得到溶液和沉淀一起转入吸附柱中,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒。
若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱,请分两次转入GBC吸附柱中,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,弃掉收集管中的废液。


9.向吸附柱中加入500ul Buffer WB(第一次使用前务必添加乙醇)高心30秒,弃废液。


10.向吸附柱 中加入600ul RNA Wash Buffer,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
注意:RNA Wash Buffer使用前请先检查是否已加入无水乙醇)

11. 向吸附柱 中加入600ul RNA Wash Buffer,12,000 rpm(-13,400xg)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

12. 12,000rpm(~13,400×g)离心1分钟,倒掉废液,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的实验


13. 将吸附柱转入一个新的离心管中,加30-100ul RNase-free Water,室温放置2分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心1分钟。
注意:洗脱缓冲液体积不应少于30ul,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液


温馨提示:1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

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